发布日期：2025-03-28 09:04 点击次数：106
泥土线虫是泥土生物中的一类数目浩大、种类丰富， 况且世俗散播于地球上扫数泥土中的泥土动物[1-2]， 占据碎片食品网的多个营养级[3]， 在泥土有机质领悟及泥土营养轮回方面有着进攻作用[4]， 是泥土换取生物的典型代表[5]。高寒草甸是青藏高原最为主要的生态系统类型之一， 极为脆弱， 对东谈主为打扰荒谬明锐[6]。西藏公路飞速发展[7-8]， 穿越各种脆弱生态系统hongkongdoll onlyfans， 其所产生的重金属粉尘等[9-10]对距公路一定规模内的泥土产生影响[11]， 成为影响公路两侧高寒草甸的潜在环境因子， 主要公路源重金属玷秽物包括铜(Cu)、锌(Zn)、铅(Pb)、镉(Cd)等[12]。
咫尺在重金属对泥土线虫的影响方面作念了一些揣测责任， 如王赚钱等[13]的揣测以为重金属玷污会裁汰稻田线虫数目， 同期更正泥土线虫群落中的r对策和K对策线虫的比例；李钰飞等[14]通过开发重金属威胁梯度揣测林地和农田泥土线虫群落特征， 发现不同生态类型泥土线虫各样性特征随重金属铜、锌浓度的变化司法不一致， 较复杂的生态类型中线虫群落对重金属的造反力较强。此类揣测一般采选的是东谈主为逼迫履行来商量泥土线虫群落变化特征， 且多使用显微镜对线虫进行样式学分离飘零， 耗时忙活[15]。高通量测序时间的发展为环境微生物群落揣测提供了便利器用16]， 被以为有较好的恶果一致性[17]， 也在不同地区泥土线虫各样性揣测方面[18-20]获取了一些应用， 但在青藏高本泥土线虫揣测方面应用还较少[21-22]。
本文应用Illumina Miseq测序时间， 在97%相似水平下对所得序列进行生物信息分析， 揣测青藏高原高寒草甸公路旁的泥土线虫群落特征， 为掌抓高寒草甸泥土线虫群落对重金属的响应， 进一步了解东谈主为打扰下的高寒草甸泥土线虫群落特征提供参考。
1 材料与技艺 1.1 履行地大要邦杰塘草原属西藏林芝市工布江达县， 远隔城市， 东谈主口少量。位于尼洋河上游， 米拉山东侧， 海拔平均约4450 m， 为高寒草甸。年降水量550 mm， 年均气温-3.8℃， 年均风速3 m/s。主要植物有峻岭嵩草(Kobresia pygmaea)、紫花针茅(Stipa purpurea)、峻岭点地梅(Androsace gmelinii)、鹅绒委陵菜(Potentilla ansrina)、马先蒿(Pedicularis reaupinanta)、唯一味(Lamiophlomis rotate)、肉果草(Lancea tibetica)等[23]。邦杰塘草原海拔落差小， 东谈主为打扰少， 主要受解放放牧影响， 拉林高级第公路相接其中， 采样点采纳在公路旁的地势平坦区域， 海拔4339 m， 坐标92°26′19.9″E， 29°54′28.27″N。
1.2 土样蚁集和泥土重金属测定于2019年8月， 在离路基0、5、15、30、50、75 m处布设与公路平行的采样线， 每条采样线每隔15 m傍边布设1个采样单位， 共设3个。各样线鉴别编号为P1、P2、P3、P4、P5、P6， 默示在距路基不同距离上的样本。使用土钻取土样， 装入塑封袋后储存在冷藏箱中尽快带回实验室。当然风干土样， 去除碎石、根系和各样残渣。一部分碾碎， 过1 mm筛。将粒径1 mm的泥土充分羼杂， 多点取样5 g傍边，幼女调教 用研钵研细， 过孔径为-0.15 mm筛， 秉承“硝酸-氢氟酸-高氯酸”消解体系进行消解， 秉承火焰原子罗致分光光度法(F-AAS)测定全量Cu、Zn、Pb、Cd。另一部分土样用以测定泥土线虫群落特征。
1.3 泥土线虫群落的高通量测序 1.3.1 DNA抽提和PCR扩增字据E.Z.N.A.® soil试剂盒(Omega Bio-tek， Norcross， GA， U.S.)阐发书进行总DNA抽提， DNA浓度和纯度应用NanoDrop2000进行检测， 应用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA抽取质地。秉承NF15′-GGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTT-3′和18Sr2bR 5′-TACAAAGGGCAGGGACGTAAT-3′引物进行PCR扩增[16， 24]。
1.3.2 Illumina Miseq测序应用上海好意思吉生物医药科技有限公司的Miseq PE300平台进行测序。
1.4 数据分析应用上海好意思吉生物医药科技有限公司云平台(www.i-sanger.com)分析泥土线虫群落过头与泥土重金属之间的关系。使用云平台mothur软件， 基于OTU水平进行各样性指数分析， 包括Shannon指数、Ace指数和Chao指数。为保证分析在团结水平上进行， 分析前进行抽平操作。秉承one-way ANOVA进行线虫数据的统计学造就。测序数据比对数据库是NCBI(NT)。RDA分析应用R谈话vegan包， 用于商量泥土线虫群落与重金属的关系性。秉承环境因子排序线性转头分析重金属因子对泥土线虫群落各样性变异的评释比例。应用SPSS 20.0软件分析泥土化学性质数据互异性。
2 恶果与分析 2.1 泥土化学性质各样本泥土化学性质如表 1。可见Cu、Pb、Zn、Cd四种重金属最小值均出当今最远的P6， 且P6的Cu、Pb、Cd与P1—P5互异权贵(P＜0.05)， Zn与P1、P2互异权贵(P＜0.05)， 但与P3、P4、P5互异不权贵。磷、pH、氮、灵验磷在P6也呈现出与其他样本的互异。
2.2 OTU构成应用物种丰富度指数sobs制作稀释弧线。如图 1所示， 各样本的sobs稀释弧线趋于率性， 数据量加多后对OTU无影响， 阐发所得序列基本不错响应骨子环境的泥土线虫群落结构。
纪湘视频在线观看不通常本泥土线虫群落共同领有的OTU有10个， 如图 2， P1特有11个OTU， P2特有2个OTU， P3特有4个OTU， P4特有3个OTU， P5特有2个OTU， P6特有9个OTU。
2.3 α各样性各样本的α各样性计算如表 2。不通常本泥土线虫群落各样性各指数略有不同， 但最小值均出当今P6。其中P6的Shannon指数与P1、P2、P3、P4互异均权贵(P＜0.05)， 与P5互异不权贵；P6的Ace指数与P1、P2、P3、P4、P5互异均权贵(P＜0.05)；P6的Chao指数与P1、P2、P3、P4、P5互异均权贵(P＜0.05)。以上标明距离公路最远的P6泥土线虫群落具有与P1、P2、P3、P4、P5不同的线虫各样性特色。
2.4 泥土线虫群落构成 2.4.1 纲水平泥土线虫群落构成纲水平泥土线虫群落散播如图 3。在P1、P2、P3、P4、P5中， 一类未分类线虫纲(unclassified_p_Nematoda)是泥土线虫上风群落， 鉴别占各样本泥土线虫群落的75.31%、68.90%、70.30%、68.58%、72.54%；其次为刺嘴纲(Enoplea)， 鉴别占各样本泥土线虫群落的13.30%、18.59%、15.64%、22.41%、22.94%；再次为色矛纲(Chromadorea)， 鉴别占各样本泥土线虫群落的11.39%、12.51%、14.06%、9.01%、4.52%。但在距公路最远的P6， 泥土线虫群落散播情景与P1、P2、P3、P4、P5均有较大不同， 色矛纲线虫(Chromadorea)成为上风线虫群落， 占68.20%；其次为一类未分类线虫纲(unclassified_p_Nematoda)， 占31.40%；刺嘴纲(Enoplea)最少， 仅占0.40%。综上， P6的上风线虫群落与P1、P2、P3、P4、P5有很大不同。这可能与泥土情景相关。
2.4.2 目水平泥土线虫群落构成目水平泥土线虫群落散播如图 4。在P1、P2、P3、P4、P5中， 一类未分类线虫目(unclassified_p_Nematoda)是上风泥土线虫群落， 鉴别占各样本泥土线虫群落的75.31%、68.90%、70.30%、68.58%、72.54%；其次为矛线目(Dorylaimida)和垫刃目(Tylenchida)， 但在P3略有不同， P3的小杆目(Rhabdtida)相对较多。与P1—P5比较， 在距公路最远的P6， 小杆目(Rhabdtida)为上风泥土线虫群落， 占59.68%；其次为一类未分类线虫目(unclassified_p_Nematoda)， 占31.40%；垫刃目(Tylenchida)最少， 仅占8.52%。从各样本可知， 目水平P6的上风泥土线虫群落与P1、P2、P3、P4、P5有很大不同。这可能与泥土情景相关。
2.5 泥土线虫群落与重金属的关系线虫门群落与泥土重金属的关系如图 5。第一和第二主轴共评释了门水平泥土线虫群落相对品貌39.22%的方差变化， 其中第一主轴评释了24.84%的方差变化， 第二主轴评释了14.38%的方差变化。Cu、Pb、Zn、Cd四种重金属均与线虫门(Nematoda)正关系。
泥土重金属与纲水平泥土线虫群落的关系如图 6。第一主轴和第二主轴共评释了纲水平泥土线虫群落相对品貌72.65%的方差变化， 其中第一主轴评释了69.16%， 第二主轴评释了17.18%。Cu、Pb、Zn、Cd四种重金属相互均呈正关系。第一主轴上的Cu和Pb是最主要的重金属影响因子， 关系所有鉴别为-0.9933和-0.9979；第二主轴上Cd是最主要的重金属影响因子， 关系所有为-0.5553。四种重金属均与刺嘴纲(Enoplea)和一类未分类线虫纲(unclassified_p_Nematoda)群落正关系， 与色矛纲(Chromadorea)群落负关系。
泥土线虫Chao指数与泥土重金属Cu、Pb、Zn、Cd的线性转头恶果如图 7， R2步骤为0.648365、0.63319、0.55778、0.17770， 阐发Cu对不同位点线虫Chao指数互异的评释度最大， Cd的评释度最小， Cu、Pb、Zn对泥土线虫各样性的影响相对较强。
3 商议与论断泥土线虫是对环境因子响应残暴的一类泥土生物[25]。泥土线虫群落的散播特征受不同生态类型的影响[14]。履行区诸位点泥土重金属与西藏泥土环境布景值[26]比较， Cu和Cd均卓越布景值， Zn和Pb均未卓越。关于履行区泥土环境布景值的探听尚未报谈， 但从距公路不同距离泥土重金属含量来看， 较远的位点泥土重金属相对较低， 表面上更围聚泥土环境布景值。一般在重金属浓度较高的泥土中， 泥土线虫数目呈下落趋势[27-28]。由于本揣测莫得秉承传统飘零法， 因此未能详情泥土线虫数目。在青藏高原高寒草甸， 先前的揣测以为Zn与线虫门(Nematoda)有较强的负关系性[22]， Zn、Cu与纲水平线虫群落关系性较大[21]。在门水平， 本揣测以为Zn、Cu等重金属与线虫门(Nematoda)有较强的正关系， 与纲水平线虫群落有较大关系， 这与先前的门水平揣测恶果恰好相悖。此外， 在纲、目水平上的线虫品貌构成与此前的揣测互异很大， 侯磊等[21]的揣测恶果标明在一般高寒草甸刺嘴纲(Enoplea)、矛线目(Dorylaimida)线虫占相对上风地位。Clarke等[29]以为一定浓度的Cu和Zn刺激线虫卵孵化经由继而加多线虫品貌， 因此初步预计在青藏高原高寒草甸里面存在区域之间的泥土线虫群落结构上的互异， 这种互异可能与不同区域泥土重金属含量相关。虽然这种互异还需要在高寒草甸进行系统的泥土线虫群落探听才可较为潜入地分析。
在青藏高原高寒草甸泥土重金属Cu、Pb、Zn、Cd含量较低的样本中hongkongdoll onlyfans， 泥土线虫群落结构与重金属含量Cu、Pb、Zn、Cd较高样本互异较着。重金属含量较低样本以色矛纲(Chromadorea)和小杆目(Rhabdtida)泥土线虫为主要群落类型；重金属含量较高样本以一类未分类线虫纲(unclassified_p_Nematoda)和一类未分类线虫目(unclassified_p_Nematoda)为主要群落类型。阐发重金属含量升高更正了高寒草甸泥土线虫纲水暖和目水平的群落结构， 使近当然情景下的色矛纲(Chromadorea)、小杆目(Rhabdtida)上风泥土线虫群落飞舞为一类未分类线虫纲(unclassified_p_Nematoda)、一类未分类线虫目(unclassified_p_Nematoda)上风泥土线虫群落。重金属Cu、Pb、Zn、Cd含量对泥土线虫群落α各样性产生影响。在重金属含量较低样本中， Shannon指数、Ace指数、Chao指数比重金属含量较高样本均要小， 且举座上Shannon指数、Ace指数、Chao指数与重金属含量较高样本互异权贵(P＜0.05)。重金属Cu、Pb、Zn、Cd与线虫门(Nematoda)和刺嘴纲(Enoplea)正关系， 但与色矛纲(Chromadorea)负关系。比较而言， 在所商议的四种重金属中， Cu对泥土线虫群落各样性变异具有最高的评释比例， Pb、Zn、Cd对变异的评释步骤减小。本揣测未能详情未分类线虫的纲、目具体称号， 应当丰富对比生物文库基础数据， 以利至今后泥土线虫群落的揣测。此外， 本文未联结线虫样式学飘零， 因此物种组因素析是基于相对品貌而言的， 无法进行定量分析[15， 30]。